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La construction de souris knock-out

 
 

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Auteur
 Sujet :

La construction de souris knock-out

 
n°4679155
perenoel
08 36 65 65 65
Posté le 11-02-2008 à 14:24:22  profilanswer
 

Savez-vous construire des souris knock-out?
NON? :eek:
 
Et bien réjouissez vous, je vais vous apprendre! :happy:
 
La construction de souris knock-out/transgénique
 
Préparation: 20 min
Cuisson: environ 6 semaines
 
C'est simple, pour cela vous avez besoin de:
- 500g de souris
- des plasmides
- des boites de pétri (plein!)
- 25g de margarine
- un caméscope toshiba ("toshiba, quand tu filmes, c'est caca" )

 
Prenez vos souris. Mettez les dans un environnement favorable à la fornication. Une fois la femelle repue de son appétit sans pareil (salsepareille spa pareil mouahaha :lol:   :indiff: ), injectez lui les cellules ES transfectées précédemment grace à votre plasmide comportant le gène d'interet que vous souhaitez étudier. Comme nous essayons de faire des knock-out, je me suis trompé dans ma partie de cours puisqu'ici nous étions parti dans la contruction de transgéniques, MAIS QU'IMPORTE!
Une fois vos cellules tranfectées, votre (ou vos, selon votre taux de réussite) souris comporte les cellules modifiées dans les tissus, c'est à dire dans les cellules somatiques. Cependant, ce qui vous intéresse, c'est de la croiser avec une autre, d'où la nécessité d'atteindre les cellules germinales. Pour cela, piquez lui les roubignoles et injectez lui profondément les plasmides jusqu'à ce qu'elle COUINE CETTE SOURIS DE MEEEEEERDE.
 
Bien.
 
Après cela, vous obtenez votre lignée Go, dont certaines cellules sont "naturellement modifiées", c'est à dire qu'elles ont été transmises et non modifées directement. J'espère que je me fais comprendre. Sinon, c'est ballot pour la suite de l'étude vous n'aller pas bien saisir!  
 
ELEVE MAKOUZINE, ARRETEZ DE FAIRE LE PITRE! AU COIN, AVEC LE BONNET D'ANE. SUR LE CHAMP!
ptit con :o
 
Bien.
 
Un fois votre lignée Go mise en place, il vous suffit de les croiser entre elles.
Et là, vous me dites: éthiquement, ça pose un problème.
Et je vous réponds: non.
voila.
 
Vous avez donc votre lignée G1, qui si tout s'est bien passé, possède non pas 25, non pas 50, mais bien 100% des cellules de votre souris qui sont modifiées messieurs dames, devant vos yeux ébahis et votre air hébété qui ne saurait me rappeller mon petit frère en train de saisir la teneur en carbone de sa couche usagée.
Cette souris possède donc le trangène et est hémizygote pour le gène en question.
 
Et là vous me dites: j'ai rien compris.
Et je vous réponds: c'est pas faux [:perenoel:2]
 
Car en effet je voulais vous présenter les souris knock-out, MAIS MAIS MAIS cette introduction était INDISPENSABLE à votre bonne compréhension du protocole qui va suivre.
Ces études furent effectuées dans le début des années 90 par machin and co.
Comment knock-outer ces souris? Telle était la question fatidique auquelle se heurtait tout généticien qui tentait de comprendre les mystérieux mécanismes du vivant. En effet l'inactivation ciblée d'un gène permet de comprendre outre sa fonction les différentes implications qu'il peut avoir dans l'individu et réveler parfois des secrets bien plus intéressants.
 
C'est simple:
plasmide. neomycine, ganciclovir. coupage du gène. double crossing over. test sur Mo+neo+ganci.
Vous cellules knock-out réussir faire
Et oui bande de petits folichons, sans le savoir vous venez d'accomplir un miracle biologique, vous avez fait un énorme trou au milieu d'un gène ciblé. Comment? Bonne chance à ceux qui veulent suivre, sans dessin ça va etre dur.
 
 

Spoiler :


Votre plasmide contient le gène de résistance à la néomycine et celui de la sensibilité au ganciclovir.  
Vous vous etes débrouillés pour que le gène de la néomycine se retrouve en plein milieu de la séquence du gène que vous voulez inactiver.
Vous etes toujours sur votre plasmide.  
Vous le transfectez dans la cellule. Du moins vous transfectez des tas de plasmides dans des tas de cellules, et vous priez Dieu qu'il vous accorde la grace et la miséricorde de passer la paroi nucléaire et de se recombiner avec un KRRRRROMOSOME.  
Pendant ce temps qui s'étend de une à deux semaines, utilisez votre caméscope Toshiba pour immortaliser la pénétration du plasmide à l'intérieur du noyau.
 
Au terme de ces semaines pendant lesquelles vous n'avez absolument rien glandé (ou tenté des choses avec des blondes mais cela ne nous... regarde pas! :o)
Toutes les cellules sont testées sur Mo+néomycine+ganciclovir.
Les cellules qui n'ont pas acquis le plasmide meurent puisque qu'elle ne résistent pas à la néomycine.
Les cellules n'ayant effectuées qu'un seul crossing over avec le plasmide l'intègre entièrement, et donc meurent puisqu'elles sont sensibles au ganciclovir.
Seules les cellules ayant effectuées un double crossing over au niveau du gène ciblé survivent car elles ont intégré uniquement le gène de résistance à la néomycine. Cependant, l'insertion de ce gène s'est faite dans l'autre gène que l'on cible, or la cellule a intégré le gène NEO en plein milieu du gène ciblé, cette conne! Du coup, ça marche plus.


 
Et voila.
N'oubliez pas de vous enduire le corps avec la margarine, c'est sexy.
Dégustez avec un blanc, de préférence servi à température ambiante.
 
Bon appétit [:perenoel:4]


Message édité par perenoel le 11-02-2008 à 14:31:42

---------------
"On ne peut pas sniffer de la coke sur les fesses d'une femme sans lui demander quels sont ses rêves, c'est malpoli!"
n°4679156
Eisenheit
La Lune te regarde
Posté le 11-02-2008 à 14:27:39  profilanswer
 

...

 

*rien compris*
*esprit inférieur détecté*

 

:hmm:


Message édité par Eisenheit le 11-02-2008 à 14:27:45

---------------
Fais du feu à un homme et il aura chaud une journée.
Fous le feu à un homme et il aura chaud jusqu'à la fin de ses jours.
n°4679157
Psychopomp​os
Mode "Boulet" ON
Posté le 11-02-2008 à 14:30:21  profilanswer
 

C'est quoi une "souris knock-out" ? Une souris assommée ?


---------------
With the lights out it's less dangerous / Here we are now, entertain us / I feel stupid and contagious / Here we are now, entertain us
Viendez sur BDTrash lire "le meilleur du pire de la BD".
n°4679158
Kuroneko
[∞]
Posté le 11-02-2008 à 14:51:10  profilanswer
 

http://tbn0.google.com/images?q=tbn:FWBgNzjVjGXA5M:http://www.astrosurf.com/luxorion/Bio/souris.jpg+http://tbn0.google.com/images?q=tbn:2M2wRqLpuohx6M:http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/a/ae/Mad_scientist.svg/200px-Mad_scientist.svg.png+http://tbn0.google.com/images?q=tbn:sC_rYDR1U0E9eM:http://www.culture-hydroponique.com/images/scalpel.gif+http://tbn0.google.com/images?q=tbn:Yes4_6nR34YuQM:http://www.stefatelier.com/catalog/images/clous.jpg = ?

 
Spoiler :

*edited suite à plainte*

  

Sinon le crossing-over stun truc de novices  [:dark-ewok:5]

 


[:perenoel:4]


Message édité par Kuroneko le 11-02-2008 à 16:56:56

---------------
I can see what you see not ~ Vision milky, then eyes rot  ~  When you turn they will be gone, Whispering their hidden song ~ Then you see what cannot be ~ Shadows move where light should be ~ Out of darkness, out of mind, Cast down into the Halls of the Blind...
n°4679159
Ilfanster
NwCo
Posté le 11-02-2008 à 14:53:42  profilanswer
 

J'ai l'impression de le dire à chaque fois que pèrenono crée un topic mais bon... Je suis en bio et j'ai rien compris :ack:
Cependant on sent que certains passages sont tirés directement de ton prof, je me trompe ?

n°4679160
ioakanan
Posté le 11-02-2008 à 15:11:44  profilanswer
 

/me happy, j'ai réussi a saisir l'essentiel :D
 
Sinon, papanowel, gg pour le topic, montre ca a tes profs, je suis sur qu'ils seront fiers de toi :D.
 
Sinon, biologie suxxx, chimie roxxx \o/

Message cité 1 fois

---------------
:love: ma liste de trade en mode solo :love: | le no-life ^^ | le mode solo, ca roxx | Le guide du Firedin | Guide de la java poison pvm | Mes bannières regroupées | THE archéo de feu :love: | Topikollecktor
Gandalf: "bin la prochaine fois, 25 ans de TT :evil: de :lol:" Il est dangereux...
La culture, c'est comme les parachutes: quand on en a pas, on s'écrase
n°4679161
Kuroneko
[∞]
Posté le 11-02-2008 à 15:19:38  profilanswer
 

ioakanan a écrit :

Sinon, biologie suxxx, chimie roxxx \o/


 
+1  :D

Message cité 1 fois

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n°4679163
ioakanan
Posté le 11-02-2008 à 15:29:19  profilanswer
 

Kuroneko a écrit :

+1  :D


Youtube marche pas au taf  :sweat:


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n°4679164
Kuroneko
[∞]
Posté le 11-02-2008 à 15:31:45  profilanswer
 

c'est un ourson en gelatine (le bonbon quoi) dans le potassium = frrrrrssshhh ^^


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n°4679165
ioakanan
Posté le 11-02-2008 à 15:38:53  profilanswer
 

Han, povre nounours  :(.  
 
Le plus marrant serait un nounours en sodium dans de l'eau ---> Boum!


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n°4679167
ditch_tdv
Tron, I has it.
Posté le 11-02-2008 à 16:15:29  profilanswer
 

Euh Dark j'aime pas faire le rabat-joie mais la je te demanderai de virer l'image! Judge viens de faire le ménage et je pense que c'est pas pour voire ce genre de choses apparaitre...

Message cité 1 fois

---------------
J'ai laissé vagabonder mon esprit et il n'est jamais revenu
[:ditch_tdv:6][:ditch_tdv:7][:ditch_tdv:8][:ditch_tdv:9]Merci a Dia et Dia
Homme ou métal il faut frapper avec force pour façonner à son gré
n°4679168
luto
:fou: :fou: :fou: :fou:
Posté le 11-02-2008 à 16:18:38  profilanswer
 

On mange la souris vivante ou pas? :]


---------------

[:luto:8][:luto:9][:kalou]
:love: Poème de Mektoubero :love: :love: Poème de Bilou :love:  
n°4679174
Shining Ba​ka
N°26: Stalker.
Posté le 11-02-2008 à 16:54:59  profilanswer
 

ditch_tdv a écrit :

Euh Dark j'aime pas faire le rabat-joie mais la je te demanderai de virer l'image! Judge viens de faire le ménage et je pense que c'est pas pour voire ce genre de choses apparaitre...


 
 
C'est dégueulasse, en plus. :vomi:


---------------
                                    :'( NOOO THEY BE STEALIN MY TRON :'(
                                         
                                         :ack: Silent Hill 2: Chibi Edition :ack:
 
n°4679175
Kuroneko
[∞]
Posté le 11-02-2008 à 16:58:18  profilanswer
 

ok, et on interdis les cours d'svt en première/terminale aussi ?

 

:rolleyes: exagérez pas non plus..

 


'fin bon j'ai edit.

 
Shining Baka a écrit :

 


C'est dégueulasse, en plus. :vomi:

 

Biquette [:tantor:5]

Message cité 2 fois
Message édité par Kuroneko le 11-02-2008 à 16:58:40

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I can see what you see not ~ Vision milky, then eyes rot  ~  When you turn they will be gone, Whispering their hidden song ~ Then you see what cannot be ~ Shadows move where light should be ~ Out of darkness, out of mind, Cast down into the Halls of the Blind...
n°4679176
Shining Ba​ka
N°26: Stalker.
Posté le 11-02-2008 à 17:00:26  profilanswer
 

Kuroneko a écrit :


 
Biquette [:tantor:5]


 
 
Tu peux me maltraiter autant d'humains que tu veux, tu touche pas aux animaux, s'tout.

Message cité 2 fois

---------------
                                    :'( NOOO THEY BE STEALIN MY TRON :'(
                                         
                                         :ack: Silent Hill 2: Chibi Edition :ack:
 
n°4679180
Hark
Paradoxe vivant
Posté le 11-02-2008 à 17:14:21  profilanswer
 

Bah en meme temps on fiat ça en Premiere/T S donc bon...
Et puis tu crois que les mecs qui font de la genetique et de la pharma, il test sur quoi leur truc?


Message édité par Hark le 11-02-2008 à 17:14:45

---------------
           (¯`· ._.·» AsSaSsInS OwN «·._. ·´¯)
       :love:Les plus belles tueuses de l'ombre:love:    
 
                                                     
n°4679181
Kuroneko
[∞]
Posté le 11-02-2008 à 17:15:37  profilanswer
 

Shining Baka a écrit :


 
 
Tu peux me maltraiter autant d'humains que tu veux, tu touche pas aux animaux, s'tout.


 
je peux te disséquer alors? :ack:


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n°4679182
Shining Ba​ka
N°26: Stalker.
Posté le 11-02-2008 à 17:17:34  profilanswer
 

D'accord. <3


---------------
                                    :'( NOOO THEY BE STEALIN MY TRON :'(
                                         
                                         :ack: Silent Hill 2: Chibi Edition :ack:
 
n°4679184
Kuroneko
[∞]
Posté le 11-02-2008 à 17:25:40  profilanswer
 

*prépare sa petite cuillère*


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n°4679187
Flolou
Less is More
Posté le 11-02-2008 à 17:32:13  profilanswer
 

http://fr.wikipedia.org/wiki/Souris_knock-out
 
Et là on a compris de quoi ça parlait.
 
Erwan il te reste du chemin pour devenir aussi explicite que wikipedia... Dommage c'est intéressant la bio :D


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 " Vive la sagesse de Salomon: Boire de bon vin, se gorger de mets délicats, se rouler sur de jolies femmes; se reposer dans des lits bien mollets. Excepté cela,le reste n'est que vanité."  Le Neveu de Rameau, Diderot
[Ma liste de trade] :|: [ﮎmileγ Factorγ] :|: [Wasteland...] :|: [†Summe deus, fiat tua sancta volontas†]
n°4679195
ditch_tdv
Tron, I has it.
Posté le 11-02-2008 à 17:49:18  profilanswer
 

Kuroneko a écrit :

ok, et on interdis les cours d'svt en première/terminale aussi ?
 
:rolleyes: exagérez pas non plus..
 
 
'fin bon j'ai edit.
 
 


 
Moi c'était pas que ca me dérangeais particulièrement mais bon je pensais surtout au fait que judge avait fait le ménage et a prévenu qu'il laisserai plus rien passer sur cette section! Je trouverai dommage de voire disparaître la THC!


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n°4679196
Kuroneko
[∞]
Posté le 11-02-2008 à 17:52:41  profilanswer
 

Ouais enfin si il a laissé la THC après les vids de hark, c'est pas une souris le ventre à l'air sous spoiler qui va le faire changer d'avis :hmm:


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n°4679197
Psychopomp​os
Mode "Boulet" ON
Posté le 11-02-2008 à 17:59:57  profilanswer
 

Vous qui trouvez atroce cette image de souris, je vous signale que dans le manuel de SVT que j'avais en classe de 5e il y avait des images au moins aussi gore.

Message cité 1 fois
Message édité par Psychopompos le 11-02-2008 à 18:00:28

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n°4679198
Kuroneko
[∞]
Posté le 11-02-2008 à 18:02:48  profilanswer
 

Quand tu vides un poisson/poulet etc.. c'est idem ^^


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n°4679199
Lolodie2
Le concept de la blonde.
Posté le 11-02-2008 à 18:36:19  profilanswer
 

Et le test du bleu blanc permet aussi de trouver les cellules qui contiennent le segment d'intérêt.
Mais c'est une autre méthode que nous ne développeront que plus tard.

Message cité 1 fois
n°4679201
Shining Ba​ka
N°26: Stalker.
Posté le 11-02-2008 à 18:40:08  profilanswer
 

Psychopompos a écrit :

Vous qui trouvez atroce cette image de souris, je vous signale que dans le manuel de SVT que j'avais en classe de 5e il y avait des images au moins aussi gore.


 
 
Idem, même celui que j'ai en Première, d'ailleurs.


---------------
                                    :'( NOOO THEY BE STEALIN MY TRON :'(
                                         
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n°4679205
Malacath
REP Zell.
Posté le 11-02-2008 à 19:29:14  profilanswer
 

Lolodie2 a écrit :

Et le test du bleu blanc permet aussi de trouver les cellules qui contiennent le segment d'intérêt.
Mais c'est une autre méthode que nous ne développeront que plus tard.


Mais oui on va faire un test du bleu/blanc sur une population de souris :'))))
On les fout toutes dans une boite de pétri géante, on les noie dans du X-gal et on regarde celle qui vire au bleu puis apres on réanime celle qui sont restées blanche ?
 
Et pour tout ceux qui comprennent rien, c'est peut etre parce que c'est pas exprimé pour qu'on puisse comprendre quelque chose ):


---------------
I switched from Windows based computers to Unix, encrypted everything on every piece of hardware, turned off all logging, changed my irc/email frequently, always connected through proxies when checking email and used dynamic IP addresses as much as possible. For instance, to boot up and logon to my main computer you need 10 different passwords to get through the various layers of encryption and security I have in place and no-one on earth is going to break those!
I feel quite secure and at the touch of a command I can format the whole lot and write zero’s to the data drives so no-one can ever retrieve data from them.
n°4679206
Lolodie2
Le concept de la blonde.
Posté le 11-02-2008 à 19:31:36  profilanswer
 

Dans son protocole il parle plus de souris :o

 

Mais si on leur donne à manger du X gal et qu'elles chient bleu ou blanc, ça sera bon, on saura si Lac Z a bien été "coupé" par la séquence d'intérêt.


Message édité par Lolodie2 le 11-02-2008 à 19:32:18
n°4679208
Kuroneko
[∞]
Posté le 11-02-2008 à 20:06:03  profilanswer
 

Mais supayr interressant toussa \o/


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n°4679221
Vieux Grog​ro
EPIC TRONIFIED FAILURE§§§
Posté le 11-02-2008 à 21:20:23  profilanswer
 
n°4679288
Frozendoll
THEY BE STEALIN MY THC
Posté le 12-02-2008 à 01:13:41  profilanswer
 

Shining Baka a écrit :


 
 
Tu peux me maltraiter autant d'humains que tu veux, tu touche pas aux animaux, s'tout.


 
J'aime bien ce genre de raisonnement. Voir des africains (qui meurent de faim) se faire charcuter à la télé, ça te dérange pas, mais une souris d'élevage disséquée ça te retournes le coeur? Cromeugnon <3
 
[godwin? toussa? à vous de juger.]

Message cité 1 fois

---------------
C'est pas parce qu'on est fidèle client à Champion qu'on a pas le droit d'aller comparer à Intermarché de temps en temps.
Bulletin spécial post-THC du petit lapin.
n°4679299
Shining Ba​ka
N°26: Stalker.
Posté le 12-02-2008 à 13:20:23  profilanswer
 

Frozendoll a écrit :


 
J'aime bien ce genre de raisonnement. Voir des africains (qui meurent de faim) se faire charcuter à la télé, ça te dérange pas, mais une souris d'élevage disséquée ça te retournes le coeur? Cromeugnon <3
 
[godwin? toussa? à vous de juger.]


 
 
 
Je regarde pas la Télé.  :ack:
 
 
 
le Godwin m'a l'air pas mal, sinon. :miam:


---------------
                                    :'( NOOO THEY BE STEALIN MY TRON :'(
                                         
                                         :ack: Silent Hill 2: Chibi Edition :ack:
 
n°4679305
EternalSun​95
Witcher
Posté le 12-02-2008 à 14:00:41  profilanswer
 

Pour le godwin, falait parler des chambres a gaz... la t'as juste droit au toussa :(

n°4679307
Shining Ba​ka
N°26: Stalker.
Posté le 12-02-2008 à 14:17:31  profilanswer
 

Toussa ?
 
 
*kof* *kof*


---------------
                                    :'( NOOO THEY BE STEALIN MY TRON :'(
                                         
                                         :ack: Silent Hill 2: Chibi Edition :ack:
 
n°4679325
Frozendoll
THEY BE STEALIN MY THC
Posté le 12-02-2008 à 17:55:54  profilanswer
 

En fait j'ai oublié de le traiter de sale Nazi...


---------------
C'est pas parce qu'on est fidèle client à Champion qu'on a pas le droit d'aller comparer à Intermarché de temps en temps.
Bulletin spécial post-THC du petit lapin.
n°4679348
Si'yann
ion négatif
Posté le 12-02-2008 à 19:16:16  profilanswer
 

Haannn...les bon vieux cours de Bio comme j'en fais plus...  :love:


---------------
"Yes, sir, I know the enginseer is annoyed, but we had to open the machine casing...yes, but we would have lost the Chimera if we didn't jury rig it...what ?...demands penance ? Front line you say ? Throne... Well, if the Emperor commands..."
n°4679350
Vieux Grog​ro
EPIC TRONIFIED FAILURE§§§
Posté le 12-02-2008 à 19:26:26  profilanswer
 
n°4679358
Shining Ba​ka
N°26: Stalker.
Posté le 12-02-2008 à 20:03:15  profilanswer
 

Vieux Grogro a écrit :

:vomi:
Heureusement que j'en ai jamais eu !


 
 
Au début du siècle on les faisait sur animaux vivants et les profs disaient, en réponse aux élèves qui se plaignaient des cris de douleurs que poussaient les pauvres bètes: "Oui mais ils n'ont pas d'âme, ils ne ressentent donc pas la douleur." :indiff:


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                                    :'( NOOO THEY BE STEALIN MY TRON :'(
                                         
                                         :ack: Silent Hill 2: Chibi Edition :ack:
 
n°4679360
perenoel
08 36 65 65 65
Posté le 12-02-2008 à 20:42:36  profilanswer
 

Ce n'est pas l'avis de M.Sautel, physiologiste, qui a décidée de supprimer une partie spécifique d'un TP de dissection pour la simple bonne raison que les étudiants oubliaient généralement la phase 1) du protocole à savoir:
"En premier lieu coupez le nerf derrière la colonne vertébrale pour que les souris ne ressentent aucune douleur".
 
 
 
[:perenoel:5]

Message cité 1 fois

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"On ne peut pas sniffer de la coke sur les fesses d'une femme sans lui demander quels sont ses rêves, c'est malpoli!"
n°4679361
Frozendoll
THEY BE STEALIN MY THC
Posté le 12-02-2008 à 20:50:11  profilanswer
 

Comme dans la Ligne Verte quoi, le mec il fait semblant de mouiller l'éponge.


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C'est pas parce qu'on est fidèle client à Champion qu'on a pas le droit d'aller comparer à Intermarché de temps en temps.
Bulletin spécial post-THC du petit lapin.
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