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La construction de souris knock-out

 

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Auteur Sujet :

La construction de souris knock-out

n°4679155
perenoel
Posté le 11-02-2008 à 14:24:22  profilanswer
 

Savez-vous construire des souris knock-out?
NON? :eek:
 
Et bien réjouissez vous, je vais vous apprendre! :happy:
 
La construction de souris knock-out/transgénique
 
Préparation: 20 min
Cuisson: environ 6 semaine
s
 
C'est simple, pour cela vous avez besoin de:
- 500g de souris
- des plasmides
- des boites de pétri (plein!)
- 25g de margarine
- un caméscope toshiba ("toshiba, quand tu filmes, c'est caca" )

 
Prenez vos souris. Mettez les dans un environnement favorable à la fornication. Une fois la femelle repue de son appétit sans pareil (salsepareille spa pareil mouahaha :lol:   :indiff: ), injectez lui les cellules ES transfectées précédemment grace à votre plasmide comportant le gène d'interet que vous souhaitez étudier. Comme nous essayons de faire des knock-out, je me suis trompé dans ma partie de cours puisqu'ici nous étions parti dans la contruction de transgéniques, MAIS QU'IMPORTE!
Une fois vos cellules tranfectées, votre (ou vos, selon votre taux de réussite) souris comporte les cellules modifiées dans les tissus, c'est à dire dans les cellules somatiques. Cependant, ce qui vous intéresse, c'est de la croiser avec une autre, d'où la nécessité d'atteindre les cellules germinales. Pour cela, piquez lui les roubignoles et injectez lui profondément les plasmides jusqu'à ce qu'elle COUINE CETTE SOURIS DE MEEEEEERDE.
 
Bien.
 
Après cela, vous obtenez votre lignée Go, dont certaines cellules sont "naturellement modifiées", c'est à dire qu'elles ont été transmises et non modifées directement. J'espère que je me fais comprendre. Sinon, c'est ballot pour la suite de l'étude vous n'aller pas bien saisir!  
 
ELEVE MAKOUZINE, ARRETEZ DE FAIRE LE PITRE! AU COIN, AVEC LE BONNET D'ANE. SUR LE CHAMP!
ptit con :o
 
Bien.
 
Un fois votre lignée Go mise en place, il vous suffit de les croiser entre elles.
Et là, vous me dites: éthiquement, ça pose un problème.
Et je vous réponds: non.
voila.
 
Vous avez donc votre lignée G1, qui si tout s'est bien passé, possède non pas 25, non pas 50, mais bien 100% des cellules de votre souris qui sont modifiées messieurs dames, devant vos yeux ébahis et votre air hébété qui ne saurait me rappeller mon petit frère en train de saisir la teneur en carbone de sa couche usagée.
Cette souris possède donc le trangène et est hémizygote pour le gène en question.
 
Et là vous me dites: j'ai rien compris.
Et je vous réponds: c'est pas faux [:perenoel:2]
 
Car en effet je voulais vous présenter les souris knock-out, MAIS MAIS MAIS cette introduction était INDISPENSABLE à votre bonne compréhension du protocole qui va suivre.
Ces études furent effectuées dans le début des années 90 par machin and co.
Comment knock-outer ces souris? Telle était la question fatidique auquelle se heurtait tout généticien qui tentait de comprendre les mystérieux mécanismes du vivant. En effet l'inactivation ciblée d'un gène permet de comprendre outre sa fonction les différentes implications qu'il peut avoir dans l'individu et réveler parfois des secrets bien plus intéressants.
 
C'est simple:
plasmide. neomycine, ganciclovir. coupage du gène. double crossing over. test sur Mo+neo+ganci.
Vous cellules knock-out réussir faire
Et oui bande de petits folichons, sans le savoir vous venez d'accomplir un miracle biologique, vous avez fait un énorme trou au milieu d'un gène ciblé. Comment? Bonne chance à ceux qui veulent suivre, sans dessin ça va etre dur.
 
 

Spoiler :


Votre plasmide contient le gène de résistance à la néomycine et celui de la sensibilité au ganciclovir.  
Vous vous etes débrouillés pour que le gène de la néomycine se retrouve en plein milieu de la séquence du gène que vous voulez inactiver.
Vous etes toujours sur votre plasmide.  
Vous le transfectez dans la cellule. Du moins vous transfectez des tas de plasmides dans des tas de cellules, et vous priez Dieu qu'il vous accorde la grace et la miséricorde de passer la paroi nucléaire et de se recombiner avec un KRRRRROMOSOME.  
Pendant ce temps qui s'étend de une à deux semaines, utilisez votre caméscope Toshiba pour immortaliser la pénétration du plasmide à l'intérieur du noyau.
 
Au terme de ces semaines pendant lesquelles vous n'avez absolument rien glandé (ou tenté des choses avec des blondes mais cela ne nous... regarde pas! :o)
Toutes les cellules sont testées sur Mo+néomycine+ganciclovir.
Les cellules qui n'ont pas acquis le plasmide meurent puisque qu'elle ne résistent pas à la néomycine.
Les cellules n'ayant effectuées qu'un seul crossing over avec le plasmide l'intègre entièrement, et donc meurent puisqu'elles sont sensibles au ganciclovir.
Seules les cellules ayant effectuées un double crossing over au niveau du gène ciblé survivent car elles ont intégré uniquement le gène de résistance à la néomycine. Cependant, l'insertion de ce gène s'est faite dans l'autre gène que l'on cible, or la cellule a intégré le gène NEO en plein milieu du gène ciblé, cette conne! Du coup, ça marche plus.


 
Et voila.
N'oubliez pas de vous enduire le corps avec la margarine, c'est sexy.
Dégustez avec un blanc, de préférence servi à température ambiante.
 
Bon appétit [:perenoel:4]


Message édité par perenoel le 11-02-2008 à 14:31:42

---------------
WALPURGIS : RITUAL (2014/11/8)
 
"Le karate, c'est pas un sport de filles"   /   Modder Morrowind   /   Modder Oblivion   /   BioFail: le genou
 
mood
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Posté le 11-02-2008 à 14:24:22  profilanswer
 

n°4679156
Eisenh
Nein Nein Nein
Posté le 11-02-2008 à 14:27:39  profilanswer
 

...

 

*rien compris*
*esprit inférieur détecté*

 

:hmm:


Message édité par Eisenh le 11-02-2008 à 14:27:45

---------------
Signature not found
n°4679157
Psychopomp​os
Get ready !
Posté le 11-02-2008 à 14:30:21  profilanswer
 

C'est quoi une "souris knock-out" ? Une souris assommée ?


---------------
* Le sapin des Nécros 2013 - Sarakiel vainqueur
* The Last Days (of the Third Age of Middle Earth) : Mod Le Seigneur des Anneaux pour Mount & Blade
* Comme disait le grand guerrier et philosophe épicurien gaulois Obélix : "Ils sont fous ces Romains !"
n°4679158
Kuro
>:3
Posté le 11-02-2008 à 14:51:10  profilanswer
 

http://tbn0.google.com/images?q=tbn:FWBgNzjVjGXA5M:http://www.astrosurf.com/luxorion/Bio/souris.jpg+http://tbn0.google.com/images?q=tbn:2M2wRqLpuohx6M:http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/a/ae/Mad_scientist.svg/200px-Mad_scientist.svg.png+http://tbn0.google.com/images?q=tbn:sC_rYDR1U0E9eM:http://www.culture-hydroponique.com/images/scalpel.gif+http://tbn0.google.com/images?q=tbn:Yes4_6nR34YuQM:http://www.stefatelier.com/catalog/images/clous.jpg = ?

 
Spoiler :

*edited suite à plainte*

  

Sinon le crossing-over stun truc de novices  [:dark-ewok:5]

 


[:perenoel:4]


Message édité par Kuro le 11-02-2008 à 16:56:56

---------------
A tree walks into a bar. It doesn’t want to leave.
n°4679159
Ilfanster
NwCo
Posté le 11-02-2008 à 14:53:42  profilanswer
 

J'ai l'impression de le dire à chaque fois que pèrenono crée un topic mais bon... Je suis en bio et j'ai rien compris :ack:
Cependant on sent que certains passages sont tirés directement de ton prof, je me trompe ?

n°4679160
ioakanan
Disciple de JeanPierre Démoral
Posté le 11-02-2008 à 15:11:44  profilanswer
 

/me happy, j'ai réussi a saisir l'essentiel :D
 
Sinon, papanowel, gg pour le topic, montre ca a tes profs, je suis sur qu'ils seront fiers de toi :D.
 
Sinon, biologie suxxx, chimie roxxx \o/


---------------
Ma liste réactualisée de trade en mode solo et en solo D2C | le no-life ^^ | le mode solo, ca roxx | Le guide du Firedin | Guide de la java poison pvm | THE archéo de feu :love: | Topikollecktor | Gandy et la grandeur des charmes...
Gandalf: "bin la prochaine fois, 25 ans de TT :evil: de :lol:" Il est dangereux...
n°4679161
Kuro
>:3
Posté le 11-02-2008 à 15:19:38  profilanswer
 

ioakanan a écrit :

Sinon, biologie suxxx, chimie roxxx \o/


 
+1  :D


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A tree walks into a bar. It doesn’t want to leave.
n°4679163
ioakanan
Disciple de JeanPierre Démoral
Posté le 11-02-2008 à 15:29:19  profilanswer
 
n°4679164
Kuro
>:3
Posté le 11-02-2008 à 15:31:45  profilanswer
 

c'est un ourson en gelatine (le bonbon quoi) dans le potassium = frrrrrssshhh ^^


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A tree walks into a bar. It doesn’t want to leave.
n°4679165
ioakanan
Disciple de JeanPierre Démoral
Posté le 11-02-2008 à 15:38:53  profilanswer
 

Han, povre nounours  :(.  
 
Le plus marrant serait un nounours en sodium dans de l'eau ---> Boum!


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n°4679167
Ditch_tdv
Tron, I has it.
Posté le 11-02-2008 à 16:15:29  profilanswer
 

Euh Dark j'aime pas faire le rabat-joie mais la je te demanderai de virer l'image! Judge viens de faire le ménage et je pense que c'est pas pour voire ce genre de choses apparaitre...


---------------
J'ai laissé vagabonder mon esprit et il n'est jamais revenu
[:ditch_tdv:6][:ditch_tdv:7][:ditch_tdv:8][:ditch_tdv:9]Merci a Dia et Dia
Homme ou métal il faut frapper avec force pour façonner à son gré
n°4679168
luto
Dindon de banquise ©Witch
Posté le 11-02-2008 à 16:18:38  profilanswer
 

On mange la souris vivante ou pas? :]


---------------
Ma TL HCL saison 6 : juste 1 rip haha
[:luto:8][:luto:9][:kalou]
:love: Poème de Mektoubero :love: :love: Poème de Bilou :love:
n°4679174
Shining Ba​ka
LA CENSURE A ENCOR FRAPER
Posté le 11-02-2008 à 16:54:59  profilanswer
 

Ditch_tdv a écrit :

Euh Dark j'aime pas faire le rabat-joie mais la je te demanderai de virer l'image! Judge viens de faire le ménage et je pense que c'est pas pour voire ce genre de choses apparaitre...


 
 
C'est dégueulasse, en plus. :vomi:


---------------
Le Comptoir ~ 16/06/2009 - 18/05/2011 ~
"En fait, tu portes pas la poisse, tu es la poisse." ©G.
n°4679175
Kuro
>:3
Posté le 11-02-2008 à 16:58:18  profilanswer
 

ok, et on interdis les cours d'svt en première/terminale aussi ?

 

:rolleyes: exagérez pas non plus..

 


'fin bon j'ai edit.

 
Shining Baka a écrit :

 


C'est dégueulasse, en plus. :vomi:

 

Biquette [:tantor:5]

Message cité 2 fois
Message édité par Kuro le 11-02-2008 à 16:58:40

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A tree walks into a bar. It doesn’t want to leave.
n°4679176
Shining Ba​ka
LA CENSURE A ENCOR FRAPER
Posté le 11-02-2008 à 17:00:26  profilanswer
 

Kuro a écrit :


 
Biquette [:tantor:5]


 
 
Tu peux me maltraiter autant d'humains que tu veux, tu touche pas aux animaux, s'tout.


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Le Comptoir ~ 16/06/2009 - 18/05/2011 ~
"En fait, tu portes pas la poisse, tu es la poisse." ©G.
n°4679180
Hark
FU MAKOUUU
Posté le 11-02-2008 à 17:14:21  profilanswer
 

Bah en meme temps on fiat ça en Premiere/T S donc bon...
Et puis tu crois que les mecs qui font de la genetique et de la pharma, il test sur quoi leur truc?


Message édité par Hark le 11-02-2008 à 17:14:45

---------------

                                                     
n°4679181
Kuro
>:3
Posté le 11-02-2008 à 17:15:37  profilanswer
 

Shining Baka a écrit :


 
 
Tu peux me maltraiter autant d'humains que tu veux, tu touche pas aux animaux, s'tout.


 
je peux te disséquer alors? :ack:


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A tree walks into a bar. It doesn’t want to leave.
n°4679182
Shining Ba​ka
LA CENSURE A ENCOR FRAPER
Posté le 11-02-2008 à 17:17:34  profilanswer
 

D'accord. <3


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Le Comptoir ~ 16/06/2009 - 18/05/2011 ~
"En fait, tu portes pas la poisse, tu es la poisse." ©G.
n°4679184
Kuro
>:3
Posté le 11-02-2008 à 17:25:40  profilanswer
 

*prépare sa petite cuillère*


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A tree walks into a bar. It doesn’t want to leave.
n°4679187
Flolou
Less is More
Posté le 11-02-2008 à 17:32:13  profilanswer
 

http://fr.wikipedia.org/wiki/Souris_knock-out
 
Et là on a compris de quoi ça parlait.
 
Erwan il te reste du chemin pour devenir aussi explicite que wikipedia... Dommage c'est intéressant la bio :D


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 " Vive la sagesse de Salomon: Boire de bon vin, se gorger de mets délicats, se rouler sur de jolies femmes; se reposer dans des lits bien mollets. Excepté cela,le reste n'est que vanité."  Le Neveu de Rameau, Diderot
[Ma liste de trade] :|: [mileγ Factorγ] :|: [Wasteland...] :|: [Summe deus, fiat tua sancta volontas]
n°4679195
Ditch_tdv
Tron, I has it.
Posté le 11-02-2008 à 17:49:18  profilanswer
 

Kuro a écrit :

ok, et on interdis les cours d'svt en première/terminale aussi ?
 
:rolleyes: exagérez pas non plus..
 
 
'fin bon j'ai edit.
 
 


 
Moi c'était pas que ca me dérangeais particulièrement mais bon je pensais surtout au fait que judge avait fait le ménage et a prévenu qu'il laisserai plus rien passer sur cette section! Je trouverai dommage de voire disparaître la THC!


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J'ai laissé vagabonder mon esprit et il n'est jamais revenu
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Homme ou métal il faut frapper avec force pour façonner à son gré
n°4679196
Kuro
>:3
Posté le 11-02-2008 à 17:52:41  profilanswer
 

Ouais enfin si il a laissé la THC après les vids de hark, c'est pas une souris le ventre à l'air sous spoiler qui va le faire changer d'avis :hmm:


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A tree walks into a bar. It doesn’t want to leave.
n°4679197
Psychopomp​os
Get ready !
Posté le 11-02-2008 à 17:59:57  profilanswer
 

Vous qui trouvez atroce cette image de souris, je vous signale que dans le manuel de SVT que j'avais en classe de 5e il y avait des images au moins aussi gore.

Message cité 1 fois
Message édité par Psychopompos le 11-02-2008 à 18:00:28

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* Le sapin des Nécros 2013 - Sarakiel vainqueur
* The Last Days (of the Third Age of Middle Earth) : Mod Le Seigneur des Anneaux pour Mount & Blade
* Comme disait le grand guerrier et philosophe épicurien gaulois Obélix : "Ils sont fous ces Romains !"
n°4679198
Kuro
>:3
Posté le 11-02-2008 à 18:02:48  profilanswer
 

Quand tu vides un poisson/poulet etc.. c'est idem ^^


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A tree walks into a bar. It doesn’t want to leave.
n°4679199
Lolodie2
Le concept de la blonde.
Posté le 11-02-2008 à 18:36:19  profilanswer
 

Et le test du bleu blanc permet aussi de trouver les cellules qui contiennent le segment d'intérêt.
Mais c'est une autre méthode que nous ne développeront que plus tard.

n°4679201
Shining Ba​ka
LA CENSURE A ENCOR FRAPER
Posté le 11-02-2008 à 18:40:08  profilanswer
 

Psychopompos a écrit :

Vous qui trouvez atroce cette image de souris, je vous signale que dans le manuel de SVT que j'avais en classe de 5e il y avait des images au moins aussi gore.


 
 
Idem, même celui que j'ai en Première, d'ailleurs.


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Le Comptoir ~ 16/06/2009 - 18/05/2011 ~
"En fait, tu portes pas la poisse, tu es la poisse." ©G.
n°4679205
Malacath
2003-2009, REP fils.
Posté le 11-02-2008 à 19:29:14  profilanswer
 

Lolodie2 a écrit :

Et le test du bleu blanc permet aussi de trouver les cellules qui contiennent le segment d'intérêt.
Mais c'est une autre méthode que nous ne développeront que plus tard.


Mais oui on va faire un test du bleu/blanc sur une population de souris :'))))
On les fout toutes dans une boite de pétri géante, on les noie dans du X-gal et on regarde celle qui vire au bleu puis apres on réanime celle qui sont restées blanche ?
 
Et pour tout ceux qui comprennent rien, c'est peut etre parce que c'est pas exprimé pour qu'on puisse comprendre quelque chose ):


---------------
"Worth it."
n°4679206
Lolodie2
Le concept de la blonde.
Posté le 11-02-2008 à 19:31:36  profilanswer
 

Dans son protocole il parle plus de souris :o

 

Mais si on leur donne à manger du X gal et qu'elles chient bleu ou blanc, ça sera bon, on saura si Lac Z a bien été "coupé" par la séquence d'intérêt.


Message édité par Lolodie2 le 11-02-2008 à 19:32:18
n°4679208
Kuro
>:3
Posté le 11-02-2008 à 20:06:03  profilanswer
 

Mais supayr interressant toussa \o/


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A tree walks into a bar. It doesn’t want to leave.
n°4679221
Vieux Grog​ro
moutarde forte.
Posté le 11-02-2008 à 21:20:23  profilanswer
 

Pas mal, ce topic :indiff:
Peut faire mieux.

n°4679288
Frozen
t'emmerde.
Posté le 12-02-2008 à 01:13:41  profilanswer
 

Shining Baka a écrit :


 
 
Tu peux me maltraiter autant d'humains que tu veux, tu touche pas aux animaux, s'tout.


 
J'aime bien ce genre de raisonnement. Voir des africains (qui meurent de faim) se faire charcuter à la télé, ça te dérange pas, mais une souris d'élevage disséquée ça te retournes le coeur? Cromeugnon <3
 
[godwin? toussa? à vous de juger.]

n°4679299
Shining Ba​ka
LA CENSURE A ENCOR FRAPER
Posté le 12-02-2008 à 13:20:23  profilanswer
 

Frozen a écrit :


 
J'aime bien ce genre de raisonnement. Voir des africains (qui meurent de faim) se faire charcuter à la télé, ça te dérange pas, mais une souris d'élevage disséquée ça te retournes le coeur? Cromeugnon <3
 
[godwin? toussa? à vous de juger.]


 
 
 
Je regarde pas la Télé.  :ack:
 
 
 
le Godwin m'a l'air pas mal, sinon. :miam:


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n°4679305
EternalSun​95
ALL GLORY TO THE ONE REAL GOD
Posté le 12-02-2008 à 14:00:41  profilanswer
 

Pour le godwin, falait parler des chambres a gaz... la t'as juste droit au toussa :(

n°4679307
Shining Ba​ka
LA CENSURE A ENCOR FRAPER
Posté le 12-02-2008 à 14:17:31  profilanswer
 

Toussa ?
 
 
*kof* *kof*


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n°4679325
Frozen
t'emmerde.
Posté le 12-02-2008 à 17:55:54  profilanswer
 

En fait j'ai oublié de le traiter de sale Nazi...

n°4679348
Si'yann
transmachin
Posté le 12-02-2008 à 19:16:16  profilanswer
 

Haannn...les bon vieux cours de Bio comme j'en fais plus...  :love:


---------------
Poivrons farcis = soirée réussie! \o/
Attention whoring in progress...or not!
n°4679350
Vieux Grog​ro
moutarde forte.
Posté le 12-02-2008 à 19:26:26  profilanswer
 

:vomi:
Heureusement que j'en ai jamais eu !

n°4679358
Shining Ba​ka
LA CENSURE A ENCOR FRAPER
Posté le 12-02-2008 à 20:03:15  profilanswer
 

Vieux Grogro a écrit :

:vomi:
Heureusement que j'en ai jamais eu !


 
 
Au début du siècle on les faisait sur animaux vivants et les profs disaient, en réponse aux élèves qui se plaignaient des cris de douleurs que poussaient les pauvres bètes: "Oui mais ils n'ont pas d'âme, ils ne ressentent donc pas la douleur." :indiff:


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Le Comptoir ~ 16/06/2009 - 18/05/2011 ~
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n°4679360
perenoel
Posté le 12-02-2008 à 20:42:36  profilanswer
 

Ce n'est pas l'avis de M.Sautel, physiologiste, qui a décidée de supprimer une partie spécifique d'un TP de dissection pour la simple bonne raison que les étudiants oubliaient généralement la phase 1) du protocole à savoir:
"En premier lieu coupez le nerf derrière la colonne vertébrale pour que les souris ne ressentent aucune douleur".
 
 
 
[:perenoel:5]


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WALPURGIS : RITUAL (2014/11/8)
 
"Le karate, c'est pas un sport de filles"   /   Modder Morrowind   /   Modder Oblivion   /   BioFail: le genou
 
n°4679361
Frozen
t'emmerde.
Posté le 12-02-2008 à 20:50:11  profilanswer
 

Comme dans la Ligne Verte quoi, le mec il fait semblant de mouiller l'éponge.

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